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1、1 課 題 1 菊 花 的 組 織 培 養(yǎng)組 織 培 養(yǎng) 是 指 在 人 工 培 養(yǎng) 基 上 ， 離 體 培 養(yǎng) 植 物 的 器 官 、 組織 、 細(xì) 胞 和 原 生 質(zhì) 體 ， 并 使 其 生 長 、 增 殖 、 分 化 以 及 再 生植 株 的 技 術(shù) 。 2 1、 組 織 培 養(yǎng) 的 原 理 是 什 么 ？2、 組 織 培 養(yǎng) 的 必 要 條 件 有 哪 些 ？3、 植 物 的 組 織 培 養(yǎng) 過 程 怎 樣 ？4、 影 響 組 織 培 養(yǎng) 的 因 素 有 哪 些 ？本 節(jié) 聚 焦 3 、 、 細(xì) 胞 分 化 的 原 因 ： 基 因 的 選 擇 性 表 達(dá) 4 5 6 7由 高 度 分

2、化 的 植 物 器 官 、 組 織 或 細(xì)胞 產(chǎn) 生 愈 傷 組 織 的 過 程 ， 又 稱 去 分化 。脫 分 化 產(chǎn) 生 的 愈 傷 組 織 在 培 養(yǎng) 過 程中 重 新 分 化 根 或 芽 等 器 官 的 過 程 8 9 10 11 12 植 物 組 織 培 養(yǎng) 的 過 程離 體 的 植物 組 織 或細(xì) 胞 愈 傷 組 織 根 和 芽 完 整 的 植物 體脫 分 化 再 分 化 13 植 物 材 料的 選 擇 直接 關(guān) 系 到實 驗 的 成敗 14 15 1、 無 機(jī) 成 分 ： 大 量 元 素 ， 微 量 元 素2、 有 機(jī) 成 分 ： 維 生 素 ， 氨 基 酸 等3、 碳 源 ：

3、一 般 為 蔗 糖4、 植 物 激 素 ： 細(xì) 胞 分 裂 素 和 生 長 素5、 其 他 添 加 劑 等 ： 如 抗 生 素6、 水7、 調(diào) 節(jié) PH8、 瓊 脂植 物 組 織 培 養(yǎng) 最 常 用 的 是 MS培 養(yǎng) 基 (附 錄 3) 16 17 18 19 20 21 培養(yǎng)基編號 濃度/mg L1 m/% n/個6BA IAA1 0.5 0 76.7 3.12 0.1 77.4 6.13 0.2 66.7 5.34 0.5 60.0 5.0練 習(xí) ： 為 了 探 究 6 BA和 IAA對 某 菊 花 品 種 莖 尖 外 植 體 再 生 叢 芽 的 影 響 ，某 研 究 小 組 在 MS培

4、 養(yǎng) 基 中 加 入 6 BA和 IAA， 配 制 成 四 種 培 養(yǎng) 基 (見 下 表 )，滅 菌 后 分 別 接 種 數(shù) 量 相 同 、 生 長 狀 態(tài) 一 致 、 消 毒 后 的 莖 尖 外 植 體 ， 在 適 宜 條件 下 培 養(yǎng) 一 段 時 間 后 ， 統(tǒng) 計 再 生 叢 芽 外 植 體 的 比 率 (m)， 以 及 再 生 叢 芽 外 植 體上 的 叢 芽 平 均 數(shù) (n)， 結(jié) 果 如 下 表 。(1)按 照 植 物 的 需 求 量 ， 培 養(yǎng) 基 中 無 機(jī) 鹽 的 元 素 可 分 為 _和_兩 類 。 上 述 培 養(yǎng) 基 中 ， 6 BA屬 于 _類 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 。

5、(2)在 該 實 驗 中 ， 自 變 量 是 _， 因 變 量 是_， 自 變 量 的 取 值 范 圍 是 _。(3)從 實 驗 結(jié) 果 可 知 ， 誘 導(dǎo) 叢 芽 總 數(shù) 最 少 的 培 養(yǎng) 基 是 _號 培 養(yǎng) 基 。(4)為 了 誘 導(dǎo) 該 菊 花 試 管 苗 生 根 ， 培 養(yǎng) 基 中 一 般 不 加 入 _(填 “ 6 BA”或 “ 1AA”)。 大 量 元 素微 量 元 素 細(xì) 胞 分 裂 素IAA濃 度再 生 叢 芽 外 植 體 上 的 叢 芽 平 均 數(shù) (n) 再 生 叢 芽 外 植 體 的 比 率 (m)和0 0.5 mgL 116 BA 22 23 （ 一 ） 制 備 M

6、S培 養(yǎng) 基（ 二 ） 外 植 體 消 毒（ 三 ） 接 種（ 四 ） 培 養(yǎng)（ 五 ） 移 栽（ 六 ） 栽 培1、 實 驗 操 作 流 程 ： 24 2、 實 驗 具 體 操 作（ 1） 制 備 MS固 體 培 養(yǎng) 基 實 驗 室 一 般 使 用 _ 保 存 的 配 制 好 的 培 養(yǎng) 基母 液 來 制 備 配 制 各 種 母 液 配 制 母 液 時 ， 大 量 元 素 濃 縮 _ ， 微 量元 素 濃 縮 _ ， 常 溫 保 存 。 激 素 類 、 維 生 素類 以 及 用 量 比 較 小 的 有 機(jī) 物 可 以 按 照 _的 質(zhì)量 濃 度 單 獨 配 制 母 液 。 用 母 液 配 制

7、 培 養(yǎng) 基 時 ， 需 要 根 據(jù) 各 種 母 液 的 濃 縮倍 數(shù) ， 計 算 用 量 。 1mg/ml4 10倍100倍 25 配 制 培 養(yǎng) 基 。2、 實 驗 具 體 操 作（ 1） .制 備 MS固 體 培 養(yǎng) 基實 驗 室 一 般 使 用 _ 保 存 的 配 制 好 的 培 養(yǎng) 基 母 液來 制 備 4 植 物 激 素在 菊 花 組 織 培 養(yǎng) 中 ， 可 以 不 添 加 _ ，原 因 是 菊 花 莖 段 組 織 培 養(yǎng) _ 。比 較 容 易 26 滅 菌將 分 裝 好 的 培 養(yǎng) 基 連 同 其 他 器 械 一 起 進(jìn) 行_。 2、 實 驗 具 體 操 作（ 1） .制 備 M

8、S固 體 培 養(yǎng) 基實 驗 室 一 般 使 用 _ 保 存 的 配 制 好 的 培 養(yǎng) 基 母 液來 制 備 4高 壓 蒸 汽 滅 菌 27 2、 實 驗 具 體 操 作（ 2） 外 植 體 消 毒 選 取 菊 花 莖 段 時 ， 要 取 _。流 水沖 洗 酒 精 無 菌 水 氯 化 汞 無 菌 水 消 毒 流 程 ：濃 度 _搖 動 _次時 間 _s 濃 度 _時 間 _min 至 少 清 洗 _次漂 凈 _生 長 旺 盛 的 嫩 枝70%2 36 7 0.1%1 2 3消 毒 液 28 不 是 。 對 外 植 體 進(jìn) 行 表 面 消 毒 時 ，既 要 考 慮 到 消 毒 效 果 ， 又 要

9、 考 慮 到 植物 的 耐 受 能 力 。 在 外 植 體 消 毒 過 程 中 ， 是 不 是 強(qiáng)度 越 大 越 好 ， 為 什 么 ？ 思 考 29 2、 實 驗 具 體 操 作（ 3） 接 種 前 期 準(zhǔn) 備 ： 用 _消 毒 工 作 臺 ， 點燃 酒 精 燈 。 所 有 工 作 都 必 須 在 酒 精 燈 旁 進(jìn) 行 ， 器械 使 用 前 后 都 要 用 _滅 菌 。 接 種 操 作 ： 插 入 外 植 體 時 _端 朝 上， 每 個 錐 形 瓶 接 種 _個 外 植 體 。70 的 酒 精火 焰 灼 燒 形 態(tài) 學(xué) 上6 8 30 31 32 33 34 35 36 37 381、 外

10、 植 體 帶 菌 2、 培 養(yǎng) 基 及 接 種器 具 滅 菌 不 徹 底3、 接 種 操 作 時 帶 入 4、 環(huán) 境 不 清 潔污 染 途 徑外 植 體 在 培 養(yǎng) 過 程 中 可 能 會 被 污 染 ， 你 認(rèn) 為 造成 污 染 的 原 因 有 哪 些 ？ 污 染 物 如 何 處 理 ？ 1、 培 養(yǎng) 基 的 滅 菌 （ 高 壓 蒸 汽 滅 菌 ）2、 外 植 體 的 消 毒 （ 酒 精 、 氯 化 汞 ）3、 接 種 的 無 菌 操 作 （ 酒 精 、 酒 精 燈 灼 燒 ）4、 無 菌 箱 中 的 培 養(yǎng) ；5、 移 栽 到 消 過 毒 的 環(huán) 境 中 生 存 一 段 時 間 。在 整

11、 個 操 作 過 程 中 ， 是 如 何 來 實 現(xiàn) 無 菌 環(huán) 境 的 ？思 考 三、結(jié)果分析與評價（一）對接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計、對照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格 41 四、課題延伸2、 培 養(yǎng) 基 的 使 用 培 養(yǎng) 出 一 株 完 整 的 試 管 苗 ， 必 須 先 進(jìn)行 生 芽 培 養(yǎng) ， 然 后 進(jìn) 行 生 根 培 養(yǎng) ， 如 果 順序 先 誘 導(dǎo) 生 根 ， 就 不 好 生 芽 。 42 43 本課題內(nèi)容小結(jié)菊 花組 織培 養(yǎng) 基 礎(chǔ) 知 識 實 驗 操 作 植 物 體 的組 織 培 養(yǎng)影 響 組 織 培養(yǎng) 的

12、因 素 細(xì) 胞 分 化細(xì) 胞 全 能 性組 織 培 養(yǎng) 過 程營 養(yǎng)激 素環(huán) 境 條 件MS固 體 培 養(yǎng) 基 制 備外 植 體 消 毒接 種培 養(yǎng)移 栽栽 培 44 作 業(yè) ： P361、 在 植 物 組 織 培 養(yǎng) 過 程 中 ， 為 什 么 要 進(jìn) 行 一 系 列 的 消 毒 、滅 菌 ， 并 且 要 求 無 菌 操 作 。2、 在 選 取 菊 花 莖 段 是 ， 為 什 么 要 選 取 生 長 旺 盛 的 嫩 枝 ？外 植 體 的 生 理 狀 態(tài) 是 成 功 進(jìn) 行 組 織 培 養(yǎng) 的 重 要 條 件 之 一 。生 長 旺 盛 的 嫩 枝 生 理 狀 況 好 ， 容 易 誘 導(dǎo) 脫 分

13、 化 和 再 分 化 。植 物 組 織 培 養(yǎng) 所 利 用 的 植 物 材 料 體 積 小 、 抗 性 差 ， 對 培 養(yǎng)條 件 的 要 求 較 高 。 用 于 植 物 組 織 培 養(yǎng) 的 培 養(yǎng) 基 同 樣 適 合 于某 些 微 生 物 的 生 長 ， 如 一 些 細(xì) 菌 、 真 菌 等 的 生 長 。 而 培 養(yǎng)物 一 旦 受 到 微 生 物 的 污 染 ， 就 會 導(dǎo) 致 實 驗 前 功 盡 棄 ， 因 此要 進(jìn) 行 嚴(yán) 格 的 無 菌 操 作 。 45 1、 下 列 實 例 中 能 體 現(xiàn) 細(xì) 胞 全 能 性 的 是 ( )。 用 懸 浮 培 養(yǎng) 的 胡 蘿 卜 單 個 細(xì) 胞 培 養(yǎng)

14、 成 了 可 育 的 植 株 植 物 用 種 子 繁 殖 后 代 用 煙 草 組 織 培 養(yǎng) 出 了 可 育 的 完 整 植 株A B C D 2、 某 同 學(xué) 在 進(jìn) 行 組 織 培 養(yǎng) 過 程 中 ， 發(fā) 現(xiàn) 只 分 裂 而 不 分化 出 芽 和 根 ， 可 能 原 因 是 ( )。A 未 見 陽 光B 培 養(yǎng) 時 間 不 到C 培 養(yǎng) 基 營 養(yǎng) 過 多D 細(xì) 胞 分 裂 素 和 生 長 素 配 比 不 對 46 3、 下 列 關(guān) 于 植 物 組 織 培 養(yǎng) 中 植 物 激 素 使 用 的 說 法 ，不 正 確 的 是 ( )。A 植 物 組 織 培 養(yǎng) 中 的 關(guān) 鍵 性 激 素 是

15、生 長 素 和 細(xì) 胞分 裂 素B 先 使 用 生 長 素 ， 后 使 用 細(xì) 胞 分 裂 素 ， 有 利 于 細(xì)胞 分 裂 和 分 化C 先 使 用 細(xì) 胞 分 裂 素 ， 后 使 用 生 長 素 ， 細(xì) 胞 既 分裂 又 分 化D 同 時 使 用 生 長 素 和 細(xì) 胞 分 裂 素 時 ， 兩 者 用 量 的比 例 影 響 植 物 細(xì) 胞 的 發(fā) 育 方 向 47 4、 在 離 體 的 植 物 器 官 、 組 織 或 細(xì) 胞 脫 分 化 形 成 愈傷 組 織 的 過 程 中 ， 下 列 哪 項 條 件 是 不 需 要 的 ( )A 消 毒 滅 菌 B 適 宜 的 溫 度C、 充 足 的 光

16、 照 D 適 宜 的 養(yǎng) 料 和 激 素 48 5、 在 菊 花 的 組 織 培 養(yǎng) 操 作 完 成 了 3 4 d后 ， 觀察 同 一 溫 室 中 的 外 植 體 ， 發(fā) 現(xiàn) 有 的 瓶 內(nèi) 外 植 體 正常 生 長 ， 有 的 瓶 內(nèi) 外 植 體 死 亡 ， 你 認(rèn) 為 外 植 體 死亡 的 原 因 不 可 能 是 ( )A 培 養(yǎng) 條 件 ， 比 如 pH、 溫 度 等 不 適 宜B 接 種 時 外 植 體 未 消 毒C 接 種 工 具 灼 燒 后 未 待 冷 卻 就 接 種 外 植 體D 將 外 植 體 倒 插 入 培 養(yǎng) 基 中 49 6、 無 菌 技 術(shù) 是 植 物 組 織 培 養(yǎng)

17、 能 否 獲 得 成 功 的 關(guān) 鍵 ，以 下 說 法 正 確 的 是 ( ) 由 于 植 物 組 織 培 養(yǎng) 所 利 用 的 植 物 材 料 體 積 小 、 抗性 差 ， 對 無 菌 操 作 的 要 求 非 常 嚴(yán) 格 對 培 養(yǎng) 基 及 器械 用 高 壓 蒸 汽 滅 菌 對 培 養(yǎng) 材 料 進(jìn) 行 表 面 消 毒 時 ，一 方 面 要 考 慮 藥 劑 的 消 毒 效 果 ， 另 一 方 面 還 要 考 慮 植物 材 料 的 耐 受 能 力 不 同 藥 劑 、 不 同 植 物 材 料 甚 至不 同 器 官 要 區(qū) 別 對 待 對 培 養(yǎng) 材 料 可 用 高 壓 蒸 汽 滅菌 如 果 不 小 心 導(dǎo) 致 污 染 ， 將 可 能 造 成 培 養(yǎng) 工 作 的前 功 盡 棄A B C D