網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù) 及臨床應(yīng)用及臨床應(yīng)用 任燕歌任燕歌1優(yōu)秀課件概概 念念網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte,Ret或Reti）界于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞。因其胞質(zhì)中殘存的核糖核酸經(jīng)堿性染料活體染色后，呈現(xiàn)點(diǎn)狀或線網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。2優(yōu)秀課件單能單能干細(xì)干細(xì)胞胞原始原始紅細(xì)紅細(xì)胞胞早幼早幼紅細(xì)紅細(xì)胞胞中幼中幼紅細(xì)紅細(xì)胞胞晚幼晚幼紅細(xì)紅細(xì)胞胞網(wǎng)織網(wǎng)織紅細(xì)紅細(xì)胞胞成熟成熟紅細(xì)紅細(xì)胞胞多能多能干細(xì)干細(xì)胞胞紅細(xì)胞發(fā)育過程圖紅細(xì)胞發(fā)育過程圖3優(yōu)秀課件各種網(wǎng)織紅細(xì)胞4優(yōu)秀課件網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)5優(yōu)秀課件網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法 活體染色手工鏡檢活體染色手工鏡檢 血液自動(dòng)分析儀法血液自動(dòng)分析儀法 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法 6優(yōu)秀課件手工鏡檢法原理 活體染料的堿性著色基團(tuán)（帶正電荷）可與網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA的磷酸基（帶負(fù)電荷）結(jié)合，使RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，形成有色的點(diǎn)狀、線狀甚至 連綴成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而血紅蛋白著色相對(duì)較淡。借此在光鏡下與成熟紅細(xì)胞相區(qū)別。7優(yōu)秀課件操作方法操作方法取干凈試管一只，加入10g/L煌焦油藍(lán)溶液23滴，然后加入等量的血液混勻后放置1520min，使紅細(xì)胞充分染色；取少許染色好的血液，在潔凈載玻片上推成薄而均勻的血膜，干燥后用瑞氏染液復(fù)染(也可不復(fù)染）；在顯微鏡低倍鏡下選擇細(xì)胞分布均勻著色清晰的部位，用油鏡在血片上計(jì)數(shù)至少1000個(gè)紅細(xì)胞分布區(qū)域內(nèi)的網(wǎng)織紅細(xì)胞再除以1000計(jì)算出網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率。同時(shí)進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，可計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞的絕對(duì)值。8優(yōu)秀課件9優(yōu)秀課件活體染色圖10優(yōu)秀課件常用儀器檢測(cè)ADVIA120儀器 對(duì)Retc可提供6個(gè)參數(shù)，包括網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)（Retic#）、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（Retic%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積（MCVr）、單個(gè)網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（CHCMr）、網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度（RDWr）、單個(gè)網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）等其中意義最大的除了總數(shù)，百分比以外，最重要的網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）參數(shù)。最大的優(yōu)點(diǎn)之一是隨時(shí)可計(jì)數(shù)Retic,十分便利，而且計(jì)數(shù)的細(xì)胞多，故很準(zhǔn)確。11優(yōu)秀課件檢測(cè)儀器12優(yōu)秀課件根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)射熒光強(qiáng)弱來(lái)判別區(qū)分網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟程度，不同成熟階段的網(wǎng)織紅細(xì)胞含有不同量的RNA，從而根據(jù)熒光強(qiáng)度而獲得低、中、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞群。L MH13優(yōu)秀課件檢測(cè)技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry）原理 RNA經(jīng)堿性熒光染料處理后，根據(jù)熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞內(nèi)RNA含量，可將Reti分為高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）、中等熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）和低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）三部分。利用上述三個(gè)指標(biāo)可計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟指數(shù)（reticulocyte materation index,RMI）。RMI對(duì)評(píng)價(jià)骨髓移植后造血功能恢復(fù)情況和EPO的療效，以及監(jiān)護(hù)放、化療對(duì)骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。14優(yōu)秀課件檢測(cè)圖示檢測(cè)圖示網(wǎng)織紅細(xì)胞平面散射圖15優(yōu)秀課件方法學(xué)評(píng)價(jià)手工鏡檢法的優(yōu)點(diǎn)是便捷、成本低。目前仍為臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢驗(yàn)方法。但致命的缺點(diǎn)是影響因素多、重復(fù)性差，CV20%，以低Reti的標(biāo)本尤為明顯。即使進(jìn)行絕對(duì)值計(jì)算，也因Reti計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確、某些貧血網(wǎng)織紅細(xì)胞提前釋放而失去其可靠性。這些不足嚴(yán)重影響了該指標(biāo)的臨床應(yīng)用。須加強(qiáng)質(zhì)量控制，必要時(shí)對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果加以校正。16優(yōu)秀課件方法學(xué)評(píng)價(jià)自動(dòng)化儀器在許多方面具有標(biāo)準(zhǔn)化程序，試劑穩(wěn)定、反應(yīng)時(shí)間一致，計(jì)數(shù)細(xì)胞量大、具有質(zhì)控和校準(zhǔn)能力，因此在精密度和準(zhǔn)確度上明顯優(yōu)于顯微鏡計(jì)數(shù)法。但儀器價(jià)格比較偏高，試劑成本和質(zhì)控成本大，影響到基層醫(yī)院、小型實(shí)驗(yàn)室的使用期望及推廣。17優(yōu)秀課件臨床應(yīng)用部分臨床應(yīng)用部分18優(yōu)秀課件臨床參考范圍目前臨床上網(wǎng)織紅細(xì)胞的參考范圍為成人：0.8%2.0%,絕對(duì)值（2575）*109/L新生兒：2.0%6.0%網(wǎng)紅的總數(shù)或百分比對(duì)貧血貧血的臨床診斷及療效觀察非常有價(jià)值，是血液最常做的項(xiàng)目之一。19優(yōu)秀課件臨床意義網(wǎng)織紅細(xì)胞不僅僅是個(gè)計(jì)數(shù)參數(shù)問題，更有許多新的參數(shù)被引入臨床應(yīng)用、科研和基礎(chǔ)研究。網(wǎng)織紅細(xì)胞的增加或減少直接反映了骨髓紅細(xì)胞的生成能力，主要用于對(duì)紅細(xì)胞減少性疾病、溶血性貧血、治療監(jiān)測(cè)或骨髓移植后骨髓造血功能的恢復(fù)、監(jiān)測(cè)放療和化療對(duì)骨髓造血功能的影響評(píng)估等方面。20優(yōu)秀課件網(wǎng)織紅細(xì)胞增高網(wǎng)織紅細(xì)胞增高提示骨髓造血功能旺盛見于各種增生性提示骨髓造血功能旺盛見于各種增生性貧血如缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血如缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞性 (缺乏葉缺乏葉酸、維生素酸、維生素B12)貧血、失血性貧血貧血、失血性貧血,尤以尤以 溶血性貧血時(shí)增加最為顯著溶血性貧血時(shí)增加最為顯著,常常10%。缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞性貧血在給予鐵劑、缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞性貧血在給予鐵劑、維生素維生素B12、葉酸治療之后、葉酸治療之后,可見網(wǎng)織紅細(xì)可見網(wǎng)織紅細(xì)胞明顯增加。胞明顯增加。21優(yōu)秀課件小細(xì)胞貧血單個(gè)網(wǎng)紅內(nèi)血紅蛋白含量（CHr）,小紅細(xì)胞比率（%Micro）/低色素紅細(xì)胞比率（%Hyp）即M/H對(duì)缺鐵性貧血是很好的指標(biāo)。缺鐵性貧血缺鐵性貧血22優(yōu)秀課件缺鐵性貧血缺鐵性貧血23優(yōu)秀課件正細(xì)胞貧血網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞增高增高正?；驕p低正?；驕p低急性出血急性出血溶血綜合征溶血綜合征骨髓衰減骨髓衰減慢性貧血慢性貧血24優(yōu)秀課件網(wǎng)織紅細(xì)胞減低網(wǎng)織紅細(xì)胞減低提示骨髓造血功能低下提示骨髓造血功能低下,常見于常見于 再生障礙性貧血再生障礙性貧血。絕對(duì)值低于絕對(duì)值低于5109/L可做為急性再生障礙性可做為急性再生障礙性 貧血的輔助診斷指標(biāo)。此外，還貧血的輔助診斷指標(biāo)。此外，還可見于骨髓浸潤(rùn)性貧血如急性可見于骨髓浸潤(rùn)性貧血如急性白血病等。25優(yōu)秀課件 圖2 骨髓浸潤(rùn)性貧血 圖1 再障性貧血26優(yōu)秀課件大細(xì)胞貧血網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞降低降低增高增高葉酸、葉酸、VitB12VitB12缺乏缺乏未經(jīng)治療的未經(jīng)治療的葉酸、葉酸、VitB12VitB12缺乏缺乏葉酸或葉酸或VitB12VitB12缺乏缺乏的急性失血的急性失血27優(yōu)秀課件網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)缺鐵性貧血或巨幼細(xì)胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療2-3d后，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值開始上升，7-10d達(dá)到最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細(xì)胞、血紅蛋白開始升高。該過程表示貧血得到糾正。若網(wǎng)織紅細(xì)胞居高不下，提示尚未達(dá)到治療效果。28優(yōu)秀課件重要分析參數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）BAYER ADVIA120 血液分析特有的測(cè)定參數(shù)之一，目前被認(rèn)為具有診斷和療效觀察價(jià)值的新的網(wǎng)織紅測(cè)定參數(shù)。CHr已經(jīng)被FDA認(rèn)可作為臨床報(bào)告參數(shù)，正常人CHr 28.0 pg/L29優(yōu)秀課件網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）計(jì)算參數(shù)計(jì)算公式：RMI=（MFR+HFR）/LFR 100%RMI對(duì)評(píng)價(jià)骨髓移植后造血功能恢復(fù)情況和EPO的療效，以及監(jiān)護(hù)放、化療對(duì)骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。30優(yōu)秀課件臨床價(jià)值血液病的診斷和治療 網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，在周圍血液中的數(shù)值可反映骨髓紅細(xì)胞的生成功能，因而對(duì)血液病的診斷和治療反應(yīng)的觀察均有其重要意義。放、化療監(jiān)測(cè) 機(jī)體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才檢測(cè)到網(wǎng)織紅細(xì)胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，又見上述指標(biāo)依次上升?？芍笇?dǎo)臨床醫(yī)師適時(shí)調(diào)整治療方案，避免造成嚴(yán)重的骨髓抑制。31優(yōu)秀課件 前景展望網(wǎng)織紅細(xì)胞分析具有很廣泛的應(yīng)用前景，新技術(shù)和新參數(shù)的應(yīng)用給臨床診斷治療 和監(jiān)測(cè)帶來(lái)新的研究方向和發(fā)展。32優(yōu)秀課件謝謝謝謝！33優(yōu)秀課件