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AFP 甲胎蛋白 臨床應(yīng)用及檢測(cè) 黃崇庭2016 6 15于柳州 甲胎蛋白 AFP 甲胎蛋白 又稱甲種胎兒球蛋白 甲型胎兒蛋白 是一種糖蛋白 屬于白蛋白家族 正常情況下 來(lái)自胚胎的肝細(xì)胞和卵黃囊 胎兒出生約兩周后甲胎蛋白從血液中消失 正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克 升 發(fā)現(xiàn)AFP 由Bergstrand和Czar于1956年在胎兒血清中發(fā)現(xiàn) 而前蘇聯(lián)的Abelev則于1963年發(fā)現(xiàn)AFP的來(lái)源主要為卵黃囊和胎盤 Tatarinov于1964年在原發(fā)性肝癌患者中發(fā)現(xiàn)了高濃度的甲胎蛋白 之后的大量研究證明甲胎蛋白是原發(fā)性肝癌 PHC 重要的血清學(xué)標(biāo)志物 并作為PHC診斷 評(píng)價(jià)療效給予后的敏感指標(biāo)應(yīng)用于臨床 AFP理化性質(zhì)和生理作用 理化性質(zhì)甲胎蛋白 Alpha FetalProtein AFP 是一種糖蛋白 分子是單一多肽鏈 屬于白蛋白家族 其主要在胎兒時(shí)期的卵黃囊和肝臟細(xì)胞中合成 分子量約為6800D AFP中蛋白質(zhì)占96 碳水化合物占4 生理作用一 胚胎性白蛋白二 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子三 配體結(jié)合及運(yùn)輸四 免疫抑制 T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡 AFP在臨床中的應(yīng)用小結(jié) 1 在產(chǎn)檢及兒科疾病中的應(yīng)用 2 原發(fā)性肝癌敏感的血清學(xué)標(biāo)志物 3 AFP在腫瘤治療中的應(yīng)用4 作為急性肝功能衰竭患者預(yù)后的標(biāo)志5 在其他腫瘤中的應(yīng)用 1 AFP在產(chǎn)檢及兒科疾病中的應(yīng)用 AFP在胚胎發(fā)育期由胎兒卵黃囊和肝臟大量合成 至妊娠12wk左右 卵黃囊退化 胎兒肝臟成為合成的主要場(chǎng)所 胎兒時(shí) 其血清濃度很高 1 10g L 出生后12 18W AFP濃度逐漸降至10 g L以下 AFP可用作篩查神經(jīng)管缺陷 非整倍體的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)志物 在神經(jīng)管缺損 脊柱裂 無(wú)腦兒等病理情況下 AFP可由開(kāi)放的神經(jīng)管進(jìn)入羊水 導(dǎo)致其在羊水中含量顯著升高 先兆子癇 婦嬰輸血 宮內(nèi)發(fā)育遲緩 胎兒死亡 AFP均有所升高 如果新生兒AFP明顯升高 提示新生兒肝炎 先天性膽道閉鎖或有能分泌AFP的胚胎性惡性腫瘤等 神經(jīng)管畸形脊柱裂 先兆子癇 胎兒死亡 新生兒肝炎先天性膽道閉鎖惡性葡萄胎 AFP水平下降表明存在染色體異常 非整倍體 如三體 以及Turner s綜合征 腦積水 胎兒生長(zhǎng)受限等 唐氏綜合癥腦積水 2 AFP作為原發(fā)性肝癌血清標(biāo)記物 肝癌 livercancer 是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤 死亡率較高 由肝臟內(nèi)的細(xì)胞所引發(fā)的癌病 稱之為 原發(fā)性肝癌 由身體其他器官的癌癥轉(zhuǎn)移到肝臟而形成的肝臟惡性腫瘤 稱為繼發(fā)性肝癌 也稱 轉(zhuǎn)移性肝癌 原發(fā)性肝癌根據(jù)組織學(xué)分類可以分為 肝細(xì)胞型 膽管細(xì)胞型 和 混合型 初期癥狀并不明顯 晚期主要表現(xiàn)為肝痛 乏力 消瘦 黃疸 腹水等癥狀 中國(guó)是乙肝大國(guó) 我國(guó)的肝癌多在乙肝肝硬化的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái) 丙肝病人也在逐漸增加 乙肝后也會(huì)發(fā)展為肝癌 肝癌按腫瘤形態(tài)基本分型 1 塊狀型 2 結(jié)節(jié)型3 彌漫型4 小肝癌 肝癌診斷一般過(guò)程 動(dòng)態(tài)觀察AFP含量的變化 AFP含量大于400 g L 影像學(xué)檢查 B超 CT及磁共振成像等 肝癌 持續(xù)一個(gè)月以上 懷疑 確診 肝癌腫瘤標(biāo)記物 肝癌腫瘤血清學(xué)標(biāo)記物包括 AFP 是目前使用最廣 最經(jīng)典的原發(fā)性肝癌特異性標(biāo)記物 GP73 是一種跨膜糖蛋白 在研究成人巨細(xì)胞性肝炎病原體時(shí)首次發(fā)現(xiàn) 在正常肝臟組織 GP73主要表達(dá)于膽管上皮細(xì)胞 而在肝細(xì)胞則無(wú)表達(dá)或表達(dá)很少 但在HBV及腺病毒感染的肝組織中 肝細(xì)胞高表達(dá)GP73 但膽管細(xì)胞表達(dá)不明顯示 早期肝癌GP73在敏感度和特異度優(yōu)于AFP 有望成為新的更有效的標(biāo)記物 SF 是人體含鐵最豐富的一種棕色蛋白復(fù)合物 存在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)如肝 脾 骨髓等處 當(dāng)肝癌擠壓肝細(xì)胞使之壞死或肝癌伴有肝硬化時(shí) 儲(chǔ)存于肝臟中的SF大量流入血循環(huán)中 引起血清SF升高 鐵蛋白有H和L兩種亞基形式 H亞基和鐵的親和力小 L亞基和鐵親和力大 正常人肝臟的鐵蛋白是以L亞基為主 而肝癌患者肝臟的鐵蛋白是以H亞基為主 H亞基鐵蛋白亦被稱作酸性鐵蛋白 AIF 被視為一種肝細(xì)胞癌的標(biāo)志物 AFU 是一種溶酶體酸性水解酶 廣泛分布于人體各種組織及體液中 其中以肝 腎等組織活性較高 細(xì)胞內(nèi)的AFU主要位于溶酶體內(nèi) AFU對(duì)小細(xì)胞肝癌及AFP陰性的肝癌診斷價(jià)值較大 其血清水平與腫瘤大小無(wú)關(guān) 升高幅度與AFP無(wú)相關(guān)性 國(guó)內(nèi)有研究者對(duì)24例肝細(xì)胞癌患者進(jìn)行血清AFU和AFP相關(guān)研究 發(fā)現(xiàn)AFU診斷敏感性為87 特異性為78 而AFP則分別為68 和89 提示AFP診斷的敏感性高但特異較AFP低 聯(lián)合檢測(cè)可提高肝癌的早期診斷率 根據(jù)AFP肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)是 AFP定量 400ng ml持續(xù)一個(gè)月以上 凡SGPT正常 AFP 200ng ml持續(xù)8周 并能排除妊娠 活動(dòng)性肝炎 生殖腺胚胎性腫瘤 即可診斷肝癌 但不是所有肝癌患者AFP水平者都是增高的 約70 左右肝癌病人AFP陽(yáng)性 所以AFP不高 亦不能否定肝癌 大量臨床研究表明 慢性肝炎和肝硬化患者 AFP常呈低濃度增高 200ng ml 并持續(xù)陽(yáng)性 低持陽(yáng) 低持陽(yáng)1年內(nèi)肝癌出現(xiàn)率為44 49 表明早期表達(dá)AFP的肝細(xì)胞是癌前病變的征象之一 AFP可成為肝癌化學(xué)預(yù)防的依據(jù) 早期肝癌與非癌肝病的鑒別診斷 在非惡性肝病中約有15 51 慢性肝病及33 急性肝炎AFP含量超過(guò)正常水平 兩者鑒別如下 SGPT數(shù)倍于正常者多為活動(dòng)性肝病 如SGPT 200單位以上者 以肝炎可能性為大 而SGPT400ng ml者多為肝癌 肝癌AFP定量呈上升曲線 肝病則隨病情穩(wěn)定AFP降至正常 AFP在腫瘤細(xì)胞中高效特異性表達(dá) 因此將外源治療基因或細(xì)胞因子置于AFP特異性啟動(dòng)子或增強(qiáng)子的下游 原發(fā)性肝癌中特異性的反式作用因子作用于該啟動(dòng)子 激活轉(zhuǎn)錄 實(shí)現(xiàn)目的基因的選擇性表達(dá) 可克服原發(fā)性肝癌基因治療有效性低 不良反應(yīng)大的弊端 AFP可以作為抗癌藥物結(jié)合物的載體 依據(jù)腫瘤細(xì)胞表面AFP受體過(guò)表達(dá) 將AFP與細(xì)胞毒性藥物偶聯(lián) AFP通過(guò)受體介導(dǎo)的胞吞途徑結(jié)合并選擇性地進(jìn)入腫瘤細(xì)胞 從而將結(jié)合的藥物特異性地送到靶細(xì)胞發(fā)揮作用 且對(duì)于由于膜受體和 或轉(zhuǎn)運(yùn)體的高表達(dá)而引起耐藥的人類腫瘤細(xì)胞具有較高的療效 3 AFP在腫瘤治療中的應(yīng)用 4 作為急性肝功能衰竭患者預(yù)后的標(biāo)志 重型肝炎患者在發(fā)生肝細(xì)胞炎癥壞死后能否有效的再生 與其預(yù)后有關(guān) AFP增高者 預(yù)后較好 原因在于 1 AFP能促進(jìn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體表達(dá) 從而促進(jìn)肝細(xì)胞增殖 分化 再生 2 AFP出現(xiàn)于有絲分裂旺盛的肝細(xì)胞和 或 幼稚肝細(xì)胞 在急性病毒性肝炎 活動(dòng)性慢性乙型肝炎和肝硬化時(shí) AFP升高標(biāo)志肝細(xì)胞再生活躍 3 AFP具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用 1 各種源于內(nèi)胚層的胃腸道腫瘤 2 內(nèi)胚竇瘤 卵黃囊瘤 3 生殖細(xì)胞癌等 5 AFP在其他腫瘤中的應(yīng)用 總結(jié)血清甲胎蛋白陽(yáng)性增高的原因 肝癌 陽(yáng)性率80 90 隨著病情惡化它在血清中的含量會(huì)急劇增加 急性肝炎慢性肝炎肝硬化 孕婦 其他腫瘤的肝轉(zhuǎn)移 一過(guò)性升高隨著病情的恢復(fù) 血清甲胎蛋白值會(huì)下降 生殖細(xì)胞腫瘤陽(yáng)性率50 AFP陽(yáng)性 AFP應(yīng)用注意事項(xiàng) 1 部分肝硬化病人會(huì)長(zhǎng)期出現(xiàn)AFP達(dá)到上千 但多年都沒(méi)有肝癌的跡象 2 同時(shí)發(fā)現(xiàn)約20 的晚期肝癌病人 直至病故前 AFP仍不超過(guò)10 3 AFP與腫瘤大小有一定的相關(guān)性 即腫瘤越小 陽(yáng)性率越低 4 AFP也與病理類型相關(guān) 癌細(xì)胞分化I級(jí)和II級(jí) AFP相對(duì)較低 級(jí)時(shí)相對(duì)較高 AFP目前的檢測(cè)方法 1 化學(xué)發(fā)光免疫分析 CLIA 是采用現(xiàn)代全自動(dòng)儀器操作控制 單克隆抗體標(biāo)記發(fā)光物質(zhì)吖啶酯或堿性磷酸酶促化學(xué)發(fā)光最新的微磁粒子標(biāo)記反應(yīng)的技術(shù) 是光的高靈敏性 單克隆抗體高特異性結(jié)合的自動(dòng)化 智能化程序的現(xiàn)代免疫定量技術(shù) 目前以電化學(xué)發(fā)光免疫分析為代表 實(shí)現(xiàn)了免疫測(cè)定的自動(dòng)化 具有測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定 線性范圍寬 測(cè)定速度快 試劑保存期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn) 但檢測(cè)成本高 2 時(shí)間分辨熒光免疫分析法 TRFIA TRFIA的基本原理是以具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合物為標(biāo)記物 用時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)儀測(cè)定最后產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度 根據(jù)產(chǎn)物熒光強(qiáng)度和相對(duì)熒光強(qiáng)度的比值 判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度 從而達(dá)到定量分析的目的 TRFIA同樣需要昂貴的檢測(cè)儀器 檢測(cè)的成本也高 不適合用于篩查大范圍人群血清AFP 3 放射免疫分析 IA 具有較高的靈敏度和檢測(cè)的準(zhǔn)確度 可以滿足臨床檢測(cè)要求 且檢測(cè)成本較適中 但該法采用放射性元素標(biāo)記抗體 試劑中存在放射性物質(zhì)環(huán)境污染的潛在危險(xiǎn)性及標(biāo)記物半衰期短 保存時(shí)間短 批間差異大的缺點(diǎn) 4 酶法檢測(cè) ELISA 多采用雙抗體夾心法的反應(yīng)原理檢測(cè)待測(cè)樣本中AFP含量 包括定性試驗(yàn)和定量檢測(cè) 操作簡(jiǎn)單 具有較高的靈敏度 不需要特殊的儀器 檢測(cè)費(fèi)用低 適合自然人群早期肝癌的普查 是發(fā)現(xiàn)早期肝癌的重要手段之一 不足之處是檢測(cè)過(guò)程中影響因素較多 重復(fù)性不高 檢測(cè)范圍較窄 定性試驗(yàn)結(jié)果的判斷受主觀人為因素的影響 每次定量檢測(cè)必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線 5 金標(biāo)快速檢測(cè)以膠體金作為指示標(biāo)記 交聯(lián) AFP單克隆抗體 與血清中AFP結(jié)合 形成雙抗體夾心一步法 是當(dāng)前國(guó)際上最簡(jiǎn)便理想的AFP檢測(cè)方法 金標(biāo)法是一種定性的檢測(cè)方法 具有簡(jiǎn)單 方便 快速的特點(diǎn) 不需要使用儀器進(jìn)行輔助 僅憑肉眼就可以對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察 十分有利于健康體檢篩查中應(yīng)用 其優(yōu)點(diǎn)是在檢測(cè)AFP上具有較高的特異性 準(zhǔn)確性 檢測(cè)成本低 檢測(cè)時(shí)間短 操作人員無(wú)需特殊的培訓(xùn)即可完成檢測(cè) 不足之處是敏感性不高 無(wú)法定量檢測(cè) 6 透射比濁法將AFP抗體吸附于乳膠顆粒上 通過(guò)抗原抗體形成免疫復(fù)合物 造成吸光度變化 實(shí)現(xiàn)了生化儀測(cè)定的自動(dòng)化 具有測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定 線性范圍寬 測(cè)定速度快 試劑保存期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn) 而且檢測(cè)成本高 與發(fā)光相關(guān)性好 Thankyou 祝愿每個(gè)人都有一個(gè)健康的肝臟