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DNA倍體和細(xì)胞周期分析 細(xì)胞周期和DNA倍體分析的原理 1 正常細(xì)胞DNA含量穩(wěn)定在2C水平 2 性細(xì)胞DNA含量為1C 3 處于增殖期至分裂期細(xì)胞由2C增加至4C 4 凋亡細(xì)胞DNA斷裂 含量 2C 細(xì)胞經(jīng)熒光染料 碘化丙啶 PI 染色 用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞DNA含量 可得到細(xì)胞周期三個時相 G0 G1 S和G2 M期 的DNA含量 可以反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)和非二倍體 異倍體 的DNA含量 Diploid 100 00 DipG1 54 38 at46 90DipG2 15 91 at91 61DipS 29 71 G2 G1 1 95 CV 5 23 G0 G1 S G2 M DNA檢測的常用術(shù)語 表示流式分析中DNA含量的分辨率或精確度 通常由G0 G1峰的CV來反映 CV SD mean x100 影響CV的因素主要包括兩方面 儀器因素 如液流 光路 機(jī)器調(diào)試等 和樣本制備及染色過程對標(biāo)本的人為影響 1 變異系數(shù) CoefficientofVariation CV DI指的是腫瘤樣本G0 G1峰的平均道數(shù)與人正常二倍體G0 G1峰的平均道數(shù)之間的比值 DI為1意味著二倍體 2c 一般正常范圍為0 9 1 1 倍體 Ploidy 原指染色體數(shù)目 流式中用來描述總的DNA含量 二倍體細(xì)胞有正常細(xì)胞的DNA含量但不除外染色體異常 DI為1 9 2 1的細(xì)胞為四倍體 CV為5 時 在二倍體和四倍體區(qū)域之外的統(tǒng)稱異倍體 2 DNA指數(shù) DNAindex DI 和倍體 Ploidy DNA檢測的常用術(shù)語 結(jié)果分析 CellQuest WinMDI等軟件均可以進(jìn)行分析 但需要手工進(jìn)行參數(shù)統(tǒng)計和計算 推薦使用ModFit分析軟件 分析如下 1 打開軟件 2 在FL2 W FL2 A散點圖中設(shè)定單個細(xì)胞門 R1 去除聚集細(xì)胞 必要時可以設(shè)兩個門 3 在FL2 A直方圖中顯示R1中細(xì)胞的DNA含量直方圖注 該軟件可以自動分析 也可手動分析 可以分析凋亡 異倍體 各期比例等 結(jié)果均自動計算 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 Fileanalyzed qq 003Dateanalyzed 3 Jun 2009Model 1DA0A DSFAnalysistype ManualanalysisDiploid 100 00 DipG1 63 02 at44 61DipG2 18 55 at86 71DipS 18 44 G2 G1 1 94 CV 6 12TotalS Phase 18 44 TotalB A D 5 45 Apoptosis 15 11 Mean 19 05Debris 6 04 Aggregates 1 72 Modeledevents 2775Allcycleevents 2166Cycleeventsperchannel 50RCS 6 238 ModFit分析 ModFit分析 重要參數(shù) DI DNA指數(shù) 判斷倍體數(shù) 標(biāo)本G0 G1期細(xì)胞峰的平均熒光道數(shù) 正常二倍體細(xì)胞G0 G1期細(xì)胞峰的平均熒光道數(shù) PI 增殖指數(shù) 表示細(xì)胞的增殖活性 S G2M G0 G1 S G2M 100 SPF S期細(xì)胞比率 表示細(xì)胞的增殖活性 S G0 G1 S G2M 100 倍體和細(xì)胞周期分析 發(fā)現(xiàn)DNA異倍體 二倍體峰DI 1 1或2 1或15 的S期細(xì)胞 并伴有G0 G1峰的CV 9 提示為腫瘤或增生旺盛的病變 如無明顯異倍體 但G0 G1峰的CV增大 并伴有 10 15 的S期細(xì)胞和一個突出的4倍體峰 診斷為可疑腫瘤或增生旺盛的病變 發(fā)現(xiàn)癌前病變 協(xié)助腫瘤早期診斷在腫瘤的診斷 預(yù)后判斷和治療中的作用在指導(dǎo)腫瘤化療中的作用 臨床意義 乳腺癌DNA異倍體患者生存率 乳腺癌腫瘤細(xì)胞異倍體患者長期生存率顯著下降 臨床病例 Diploid 46 75 DipG1 97 54 at46 06DipG2 0 58 at92 12DipS 1 88 G2 G1 2 00 CV 2 26Aneuploid1 47 55 An1G1 93 05 at49 83An1G2 0 00 at99 67An1S 6 95 G2 G1 2 00 CV 2 13DI 1 08Aneuploid2 5 70 An2G1 94 97 at55 72An2G2 5 03 at103 44An2S 0 00 G2 G1 1 86 CV 4 52DI 1 21 AL骨髓 Diploid 64 50 DipG1 92 45 at49 24DipG2 2 30 at98 48DipS 5 26 G2 G1 2 00 CV 3 21Aneuploid1 35 50 An1G1 97 69 at58 53An1G2 0 00 at123 89An1S 2 31 G2 G1 2 12 CV 3 14DI 1 19TotalAneuploidS Phase 2 31 TotalS Phase 4 21 TotalB A D 0 35 Debris 1 14 Aggregates 0 00 Modeledevents 3567Allcycleevents 3526Cycleeventsperchannel 47RCS 2 356 MM骨髓 宮頸脫落細(xì)胞 Diploid 97 61 DipG1 97 74 at49 78DipG2 0 02 at99 57DipS 2 25 G2 G1 2 00 CV 6 49Aneuploid1 2 39 An1G1 84 90 at75 79An1G2 15 10 at109 99An1S 0 00 G2 G1 1 45 CV 3 66DI 1 52 肺癌胸水 Diploid 100 00 DipG1 55 08 at46 83DipG2 15 67 at92 69DipS 29 25 G2 G1 1 98 CV 7 02 增殖旺盛的腫瘤細(xì)胞株