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2019年《生物技術(shù)制藥》作業(yè)題資料附答案 1. 什么是cDNA文庫(kù)？ 以mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA，并能繁殖擴(kuò)增，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細(xì)胞的cDNA文庫(kù)。 2. 構(gòu)建cDNA文庫(kù)的基本步驟？ 1、mRNA的純化：2、cDNA第一鏈的合成；3、cDNA第二鏈的合成；4、cDNA的克??；5、將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞；6、cDNA文庫(kù)的鑒定：抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法 3. 基因工程藥物制藥的主要程序有哪些？ 1、 目的基因的克隆2、構(gòu)建DAN重組體3、DAN重組體轉(zhuǎn)入宿主菌 4、 構(gòu)建工程菌5、工程菌發(fā)酵6、表達(dá)產(chǎn)物的分離純化7、產(chǎn)品的檢驗(yàn)等 4. 什么是生物技術(shù)制藥？ 采用現(xiàn)代生物技術(shù),借助某些微生物、植物、動(dòng)物生產(chǎn)醫(yī)藥品，叫作生物技術(shù)制藥。 5. 舉例生物技術(shù)藥物，6例 干擾素、白細(xì)胞介素、粒細(xì)胞集落刺激因子、紅細(xì)胞生成素、胰島素、乙肝疫苗 6. 新型生物反應(yīng)器有哪些？ 新型生物反應(yīng)器有: 1.氣升式生物反應(yīng)器 2.流化床式生物反應(yīng)器 3.固定床式生物反應(yīng)器 4.袋式或膜式生物反應(yīng)器 5.中空纖維生物反應(yīng)器 7. 生物技術(shù)藥物按照醫(yī)學(xué)用途有哪些分類？ 按照醫(yī)學(xué)用途分類： 1.治療藥物 2.診斷藥物 3.預(yù)防藥物 8. 生物技術(shù)藥物的特性有哪些？ 1.分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜 2.具有種屬特異性 3.治療針對(duì)性強(qiáng)，療效高 4.穩(wěn)定性差 5.基因穩(wěn)定性6.免疫原性 7.體內(nèi)t1/2短 8.受體效應(yīng) 9.多效性和網(wǎng)絡(luò)性效應(yīng) 10.檢驗(yàn)的特殊性 9. 適合目的基因表達(dá)的宿主細(xì)胞應(yīng)滿足哪些要求？ 1、 容易獲得較高濃度的細(xì)胞；2、能利用易得廉價(jià)原料；3、不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素； 4、 發(fā)熱量低、需氧低、適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)；5、容易進(jìn)行代謝調(diào)控； 5、 容易進(jìn)行DNA重組技術(shù)操作；7、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提取純化 10. 宿主細(xì)胞分為哪兩大類？ 第一類為原核細(xì)胞：常用有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、鏈霉菌等； 第二類為真核細(xì)胞：常用有酵母、絲狀真菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。 11. 大腸桿菌作為宿主細(xì)胞表達(dá)基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點(diǎn)？ 優(yōu)點(diǎn)： 1　 大腸桿菌生長(zhǎng)迅速，分子遺傳學(xué)研究深入，目前是基因工程研究中采用最多的原核表達(dá)體系。 2　 表達(dá)基因產(chǎn)物形式多樣：細(xì)胞內(nèi)不溶性表達(dá)(包含體)、細(xì)胞內(nèi)可溶性表達(dá)、細(xì)胞周質(zhì)表達(dá)等。 3　 大腸桿菌中的表達(dá)不存在信號(hào)肽，產(chǎn)品多為胞內(nèi)產(chǎn)物，提取困難。 缺點(diǎn)： 4　 因分泌能力不足，真核蛋白質(zhì)常形成不溶性的包含體，表達(dá)產(chǎn)物需經(jīng)變性、復(fù)性才恢復(fù)活性。 5　 蛋白質(zhì)不能糖基化。 6　 產(chǎn)物蛋白質(zhì)N端多余一個(gè)蛋氨酸（甲硫氨酸）殘基。 7　 其內(nèi)毒素很難除去。 12. 酵母菌作為宿主細(xì)胞表達(dá)基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點(diǎn)？ 優(yōu)點(diǎn)：分泌能力強(qiáng)，能正確進(jìn)行翻譯后加工（肽剪切糖基化）有成熟的發(fā)酵和后處理工藝。 缺點(diǎn)： 13. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞作為宿主細(xì)胞表達(dá)基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點(diǎn)？ 優(yōu)點(diǎn)：表達(dá)產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中，純化容易。產(chǎn)物是糖基化的接近天然物。 缺點(diǎn)：生長(zhǎng)慢，生產(chǎn)率低，培養(yǎng)條件苛刻，費(fèi)用高，培養(yǎng)液濃度稀。 14. 影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素？ 外源基因表達(dá)產(chǎn)量與細(xì)胞濃度和單個(gè)細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)量呈正相關(guān)。單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)量取決于： ⑴外源基因的拷貝數(shù) ⑵ 外源基因的表達(dá)效率 ①啟動(dòng)子的強(qiáng)弱 ②核糖體接合位點(diǎn)的有效性 ③SD序列和起始密碼ATG的間距 ④密碼子組成 ⑶表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性 ⑷細(xì)胞代謝負(fù)荷 ⑸工程菌的培養(yǎng)條件 15. 動(dòng)物細(xì)胞來(lái)源的藥物的種類有哪些？ ⒈ 動(dòng)物細(xì)胞多肽與蛋白質(zhì)類藥物 ⑴多肽藥物 ① 多肽激素 ② 多肽類細(xì)胞因子 ⑵ 蛋白質(zhì)類藥物 ⒉動(dòng)物酶與輔酶類藥物 ⑴促消化酶類 ⑵消炎酶類 ⑶治療心腦血管類疾病的相關(guān)酶 ⑷抗腫瘤的酶 ⑸與電子傳遞有關(guān)的治療酶 ⑹其它藥用酶 ⑺動(dòng)物輔酶類藥物 ⒊動(dòng)物核酸類藥物 ⒋動(dòng)物糖類藥物：粘多糖類：甲殼素、硫酸軟骨素、肝素、透明質(zhì)酸 ⒌動(dòng)物脂類藥物 16 動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)藥物的特點(diǎn)有哪些？ 1　 哺乳動(dòng)物細(xì)胞外源基因表達(dá)產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化的細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中，使產(chǎn)物易純化。 2　 基因產(chǎn)物糖基化接近天然產(chǎn)物。 17 基因載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的常用方法有哪些？ 18. 桿狀病毒載體的優(yōu)點(diǎn)？ ①雙鏈DNA，易重組 ②插入7～8kb DNA不影響正常病毒粒子的形成。 ③多角體蛋白和病毒粒子的形成無(wú)直接關(guān)系，因此用外源基因更換多角體蛋白基因，仍能形成有感染力病毒粒子； ④多角體蛋白基因有非常強(qiáng)的啟動(dòng)子，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的20%～30%； ⑤用光學(xué)顯微鏡可看到多角體，可以此作為標(biāo)記物，選陽(yáng)性克隆。 ⑥如用家蠶桿狀病毒，還可在蠶體表達(dá)外源基因 19 什么是抗體，抗體是怎樣產(chǎn)生的？ （1） 抗體是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。 （2） 抗體的產(chǎn)生：機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞被活化增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白。 20 什么是單克隆抗體（monoclonal antibody，McAb） 針對(duì)一個(gè)抗原決定簇，由單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生，具有高度特異性、均一性、來(lái)源穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)等特點(diǎn)的抗體。 21 怎樣制備單克隆抗體（McAb） 在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，可制備針對(duì)一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。 22基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的兩種主要表現(xiàn)形式是什么？基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的主要機(jī)制是什么？ 分裂不穩(wěn)定：指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。 ⑴含質(zhì)粒菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代菌的頻率（質(zhì)粒丟失率）； ⑵這兩種菌（含質(zhì)粒菌和不含質(zhì)粒菌）比生長(zhǎng)速率差異的大小。 23 動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法有哪些？各自的特點(diǎn)是什么？ 1.懸浮培養(yǎng):讓細(xì)胞自由的懸浮于培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。 2.貼壁培養(yǎng):讓細(xì)胞貼附在某種基質(zhì)上生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)方法。 3.貼壁-懸浮培養(yǎng)（假懸浮培養(yǎng)） 24. 改造后的鼠源性單克隆小分子抗體的類型及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？ 基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源單抗的V區(qū)片段，相對(duì)分子量為原抗體的1/80～1/3。即保留CDR區(qū)，而Ig 分子中的C區(qū)不表達(dá)。 小分子抗體類型有： ①Fab片段抗體 ②Fv抗體（抗體可變區(qū)片段） ③單鏈抗體（scFv） ④單域抗體 ⑤分子識(shí)別單位（MRU） 25. 闡述對(duì)鼠源性單克隆抗體進(jìn)行改造的目的是什么？ 鼠源性單克隆抗體，應(yīng)用人體時(shí)會(huì)產(chǎn)生人抗鼠抗體及毒副作用。通過(guò)DNA水平對(duì)對(duì)鼠源性的Ig基因進(jìn)行切割、拼接或修飾的改造，可以降低免疫源性；降低相對(duì)分子量。更符合人類的需求。