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分枝桿菌,林徽因,李嘉誠(chéng),汪涵,哈佛,李冰冰,李冰冰,俞敏洪,概 述,分枝桿菌屬（Mycobacterium）是一類細(xì)長(zhǎng)、直或略帶彎曲專性需氧性桿菌。無動(dòng)力、無牙胞、細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)，該菌一般認(rèn)為革蘭染色陽(yáng)性。多數(shù)細(xì)菌在生長(zhǎng)的一定時(shí)期抵抗酸-醇（acid-alcohol-fast），故又稱抗酸桿菌（acid-fast bacillus）,結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB） 簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌 人和動(dòng)物結(jié)核病的病原菌,第一節(jié) 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群,三個(gè)時(shí)期： 1882年結(jié)核菌被發(fā)現(xiàn)之前，稱之為“白色瘟疫” 1882-1945年，發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌到抗結(jié)核藥物沒有廣泛應(yīng)用前。 1945年以后，進(jìn)入現(xiàn)代化學(xué)療法階段,1882年3月24日世界著名的科學(xué)家德國(guó)的Robert Koch在柏林發(fā)現(xiàn)并證實(shí)結(jié)核桿菌是結(jié)核病的病原體。,流行病學(xué),全球疫情 1/3感染 新發(fā)900萬(wàn)/年 300萬(wàn)/年死亡 我國(guó)疫情 5.5億感染者 估算有450萬(wàn)病人 新發(fā)145萬(wàn)/年 65萬(wàn)/年傳染 13萬(wàn)/年死亡,特點(diǎn) 1.細(xì)胞壁含有大量的脂類 2.菌體不易著色，不易脫色，故采用抗酸染色、又稱抗酸桿菌 3.無特殊結(jié)構(gòu)，也不產(chǎn)生內(nèi)外毒素。 4.所致感染多為慢性過程,結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTBC）包括 人結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis） 牛分枝桿菌（M.bovis） 非洲分枝桿菌（M.africanum） 坎納分枝桿菌（M.canettii） 田鼠分枝桿菌(M.microti)等 前四種對(duì)人類致病，其中人型MTB感染率最高,一、分 類,流動(dòng)人口的劇增 耐多藥結(jié)核菌的出現(xiàn) 人類免疫缺陷病毒的蔓延,二、臨床意義,WHO :世界仍處于 結(jié)核病嚴(yán)重威脅之中,生物學(xué)性狀,1.形態(tài)染色：菌體細(xì)長(zhǎng)微彎曲，有分枝，排列不規(guī)則，單個(gè)散在。易發(fā)生L型抗酸染色陽(yáng)性 2.培養(yǎng)特性： ◆專性需氧，最適溫度37℃5-10%CO2可促進(jìn)生長(zhǎng) ◆營(yíng)養(yǎng)要求高，羅氏培養(yǎng)基（蛋黃、甘油、天門冬素、馬鈴薯、無機(jī)鹽、孔雀綠） ◆生長(zhǎng)緩慢，18小時(shí)分裂一次，2-4周形成R型菌落，“菜花樣菌落”，乳白色干燥不透明，表面呈顆粒結(jié)節(jié)，邊緣不整。 3.抵抗力：含大量脂質(zhì)，抵抗力強(qiáng)抗干燥、抗酸堿、抗化學(xué)消毒劑、對(duì)濕熱和紫外線敏感 4.變異性：結(jié)核桿菌易發(fā)生菌落形態(tài)（L型）、毒力（BCG）、免疫原性和耐藥性變異。,致病性,一.致病物質(zhì) 1.脂質(zhì)：磷脂能促進(jìn)使單核細(xì)胞增生，引起結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死； 分枝菌酸與菌體的抗酸性有關(guān)； 梭狀因子能破壞線粒體膜，抑制白細(xì)胞游走，引起慢性肉芽 腫； 蠟質(zhì)D能激發(fā)機(jī)體的Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)；硫酸腦苷脂能抑制吞噬與溶酶 體的結(jié)合 2.蛋白質(zhì)：誘發(fā)變態(tài)反應(yīng) 3.多糖：與蠟質(zhì)D結(jié)合能引起局部病灶的細(xì)胞浸潤(rùn) 4分枝桿菌生長(zhǎng)素：脂溶性的鐵熬合物,,二.所致疾病： 1：原發(fā)感染：多見于兒童。常有肺門淋巴結(jié)大、干酪樣壞死和結(jié)核結(jié)節(jié)的形成，也可經(jīng)血到達(dá)多個(gè)臟器引起相應(yīng)結(jié)核病。 2繼發(fā)感染：多見于成人或較大的兒童，也以肺部多見，特點(diǎn)為病灶局限，不易累積鄰近淋巴結(jié)，病灶常鈣化而愈，也可破潰成空洞。 三、免疫性 1.免疫機(jī)理：傳染性免疫，主要是細(xì)胞免疫 2.免疫與變態(tài)反應(yīng)：T細(xì)胞介導(dǎo)的結(jié)果,,結(jié)核菌素試驗(yàn)（OT）： ①原理：細(xì)胞免疫或Ⅳ變態(tài)反應(yīng)。 ②方法：用OT或PPD所做的皮內(nèi)試驗(yàn) ③結(jié)果：陽(yáng)性5mm＜紅腫硬結(jié)直徑＜2cm強(qiáng)陽(yáng)性紅腫硬結(jié)直徑＞2cm；陰性紅腫硬結(jié)直徑＜5mm ④意義：陽(yáng)性：已感染過結(jié)核，但不一定有結(jié)核病；強(qiáng)陽(yáng)性：可能有活動(dòng)性結(jié)核??；陰性：未感染過結(jié)核，應(yīng)排除感染初期或免疫力下降,微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）基本特性 結(jié)核分枝桿菌尚未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素及侵襲性酶 致病性可能與細(xì)菌在組織細(xì)胞內(nèi)大量繁殖引起的炎癥、代謝物質(zhì)的毒性以及菌體成分引起的免疫損傷有關(guān) 結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)主要是莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（二）標(biāo)本采集 據(jù)感染部位的不同采集不同的標(biāo)本 疑肺結(jié)核：收集清晨第一口痰，清潔干燥的容器內(nèi)送檢 疑泌尿系結(jié)核：清晨一次全部尿量或24小時(shí)尿沉淀10～15ml送檢，必要時(shí)作無菌導(dǎo)尿送檢（診斷泌尿道結(jié)核通常需3～5份標(biāo)本） 采集膿液應(yīng)直接從潰瘍處取膿汁或分泌物,深部膿腫用無菌注射器抽取送檢 其他：無菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關(guān)節(jié)液等盛無菌試管送檢。腦脊液標(biāo)本靜置后，表面可有細(xì)薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養(yǎng),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）標(biāo)本直接檢查 形態(tài)學(xué)檢查 （1）直接涂片染色鏡檢 （2）濃縮集菌涂片檢查法 2. 核酸檢測(cè),形態(tài)學(xué)檢查,齊-尼染色（Ziehl-Neelsen technique）是常用的抗酸染色法，染色后結(jié)核分枝桿菌呈紅色，背景呈藍(lán)色,形態(tài)學(xué)檢查,用熒光染料金胺“O”染色，在熒光顯微鏡下菌體呈橘黃色,涂片鏡檢的報(bào)告方式,,用PCR法快速診斷MTB感染 PCR法檢測(cè)DNA特異性更強(qiáng)，敏感性更高 PCR須按法規(guī)要求規(guī)范操作，應(yīng)防止標(biāo)本污染出現(xiàn)假性結(jié)果,核酸檢測(cè),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）分離培養(yǎng)與鑒定 培養(yǎng)特性 專性需氧 3％～5％CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng) 營(yíng)養(yǎng)要求高:須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及含某些無機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)良好。常用羅氏培養(yǎng)基 最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，最適pH6.5～6.8 14～18h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2～5周才出現(xiàn)肉眼可見的菌落 典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣,2.分離培養(yǎng) 標(biāo)本接種于選擇性培養(yǎng)基中(常用羅氏，所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長(zhǎng)) 37℃，5％～10％CO2培養(yǎng)8周 結(jié)核桿菌出現(xiàn)干燥呈顆粒狀、灰白色菌落 涂片染色為抗酸陽(yáng)性,Bactec –TB 960快速培養(yǎng)系統(tǒng),3D-120型,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）分離培養(yǎng)與鑒定 3. 菌種鑒定 (1) 生化反應(yīng) （2）噬菌體鑒定法 （3）分子生物法菌種鑒定 (4)高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)分枝菌酸,生化反應(yīng)--煩瑣、費(fèi)時(shí)（ 4～8 周）,影響因素多,結(jié)核分枝桿菌不發(fā)酵糖類 能產(chǎn)生觸酶 人型MTB能合成煙酸，還原硝酸鹽，耐受噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB則不能 人型和牛型的毒株中性紅試驗(yàn)均陽(yáng)性，無毒株則為陰性，并失去索狀生長(zhǎng)現(xiàn)象,噬菌體鑒定法（PhaB）,Wilson 等于1997年建立的快速檢測(cè)新技術(shù) 原理：是分枝桿菌噬菌體D29能感染活的分枝桿菌,未進(jìn)入感染菌體內(nèi)的噬菌體被隨后加入的殺毒劑滅活 ,已進(jìn)入菌體內(nèi)的噬菌體不受影響。噬菌體在感染菌體內(nèi)大量增殖 ,并將菌體裂解 ,釋放出的子代噬菌體可感染隨后加入的指示細(xì)胞 ,并將其裂解 ,在瓊脂平板上出現(xiàn)透亮的噬菌斑。,分子生物法菌種鑒定,PCR 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（PCR-RFLP） PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（PCR-SSCP） 核酸探針 核酸序列分析 多重PCR,高效液相色譜（HPLC）,檢測(cè)分枝菌酸：由于不同種的分枝桿菌細(xì)胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC檢測(cè)分枝菌酸可鑒定菌種。,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（五） 免疫學(xué)診斷 1．結(jié)核菌素試驗(yàn) 2．結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè) 3. 結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè) 4. 全血干擾素測(cè)定法,結(jié)核菌素試驗(yàn),針對(duì)舊結(jié)核菌素(OT)與結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)兩種菌體蛋白 原理：當(dāng)將蛋白注入皮內(nèi)后，如受試者已感染結(jié)核桿菌，則結(jié)核菌素與致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合，在局部釋放淋巴因子，形成遲發(fā)性超敏反應(yīng)性炎癥，若受試者未感染MTB則無反應(yīng)。,結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè),用ELISA 方法在血清中檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原-結(jié)核菌外分泌特異性抗原 (external secreted specific antigen) 濃度。 任何體液如血液、痰液、脊髓液、尿液和各式組織萃取液等體液可用于檢測(cè)特異蛋白抗原。,結(jié)核抗體,作為活動(dòng)性MTB感染的快速診斷方法之一 比傳統(tǒng)的痰涂片抗酸染色、MTB培養(yǎng)等方法簡(jiǎn)便、快速、敏感性高，但存在一定的假陽(yáng)性。 近年，膠體金、蛋白芯片檢查結(jié)核桿菌IgG抗體抗體，特別是后者，針對(duì)三種抗原（脂阿拉伯甘露糖、38K Da和16K Da蛋白質(zhì)抗原），其靈敏度和特異性均有所提高。,全血干擾素測(cè)定法,原理：當(dāng)全血與PPD和對(duì)照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴細(xì)胞可分泌IFN-γ，通過檢測(cè)IFN-γ的含量來鑒定菌種。 2004年，Quantiferon-TB Gold assay 問世，應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)域編碼的早期分泌抗原靶（ESAT）和培養(yǎng)濾液蛋白（CFP-10）特異抗原刺激細(xì)胞檢測(cè)。 近來ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于診斷活動(dòng)性結(jié)核病，準(zhǔn)確、靈敏、特異、快速。 結(jié)果與結(jié)核菌素試驗(yàn)相當(dāng)，干擾因素小。,（六）藥物敏感性試驗(yàn) 將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基上，同時(shí)做不含藥物的對(duì)照組。 經(jīng)過培養(yǎng)，含有藥物的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目是對(duì)照組的75％以上，則認(rèn)為該菌對(duì)該藥物濃度為完全耐藥，如無菌落生長(zhǎng)則為敏感。,三、微生物檢驗(yàn),第二節(jié) 非結(jié)核分枝桿菌,一、概述與分類 二、臨床意義 三、微生物學(xué)檢驗(yàn),一、概述與分類,非結(jié)核分枝桿菌（Ｎontuberculosis Mycobactericum，NTM） : 指結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、坎納分枝桿菌和田鼠分枝桿菌) 和麻風(fēng)分枝桿菌以外的其他分枝桿菌。,NTM種類眾多，現(xiàn)已被鑒定的有150余種,包括專性寄生菌、腐生菌和中間型。 國(guó)際分枝桿菌分類研究組（IWGMT）分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、快速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型。 Runyon按細(xì)菌產(chǎn)色素和生長(zhǎng)速度將臨床重要分枝桿菌分為RunyonⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群,概 述,Runyon 分類法,Ⅰ群———光產(chǎn)色菌,如猿猴分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌; Ⅱ群———暗產(chǎn)色菌,如蘇加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、戈登分枝桿菌; Ⅲ群———不產(chǎn)色菌,如鳥分枝桿菌復(fù)合群(M1avium complex ,MAC) 、瑪爾摩分枝桿菌、土地分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、嗜血分枝桿菌; Ⅳ群———快生長(zhǎng)菌,如偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌。,二、臨床意義,迄今為止已發(fā)現(xiàn)NTM有150余種，其中約1/3與人類疾病有關(guān)。 條件致病菌 毒力低于結(jié)核分枝桿菌 自然界中廣泛存在 可以在人體某些部位定植 結(jié)核病和NTM感染的治療不同,為何要關(guān)注NTM？,自然界中廣泛存在，如水、土壤和氣溶膠，可導(dǎo)致免疫力低下的患者感染。 近年來，因手術(shù)器械、注射器具及醫(yī)療用水等滅菌不合格、使用不規(guī)范造成患者手術(shù)切口、注射部位NTM感染暴發(fā)事件。,如：廣東省某中心衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)患者手術(shù)切口感染事件。 該事件是由于手術(shù)器械滅菌不合格導(dǎo)致的手術(shù)切口感染，病原菌為快速生長(zhǎng)型分枝桿菌。,警鐘長(zhǎng)鳴——NTM潛在殺手？,衛(wèi)生部關(guān)于嚴(yán)重醫(yī)院感染事件通報(bào) — 1. 關(guān)于深圳市某醫(yī)院發(fā)生嚴(yán)重醫(yī)院感染事件的通報(bào) 2. 衛(wèi)生部關(guān)于安徽省某立醫(yī)院惡性醫(yī)療損害事件的通報(bào) 3. 關(guān)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院某醫(yī)院發(fā)生嚴(yán)重醫(yī)院感染事件的通報(bào) 4. 關(guān)于山西省太原某中心醫(yī)院血液透析感染事件的通報(bào) 5. 關(guān)于天津市薊縣某院新生兒醫(yī)院感染事件的通報(bào) 6. 衛(wèi)生部關(guān)于安徽省某縣醫(yī)院血液透析患者感染丙肝事件的通報(bào) 7. 關(guān)于廣東省汕頭市潮陽(yáng)區(qū)某中心衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)患者手術(shù)切口感染事件的通報(bào) ———摘自江蘇省衛(wèi)生廳《嚴(yán)重醫(yī)院感染事件通報(bào)與處罰規(guī)定選編》（2010年7月）,光產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon Ⅰ群）,堪薩斯分枝桿菌（M.kansaii）：能引起肺內(nèi)和肺外類似結(jié)核樣的病變 海分枝桿菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起冷血?jiǎng)游铮ㄈ玺~）感染外，亦能引起人的感染。通過皮膚微小創(chuàng)口侵入皮膚而引起所謂的“游泳池肉芽腫”。漁業(yè)工人可經(jīng)受損皮膚遭受感染 猿分枝桿菌（M.simiae）：首先從猿分離到此菌，形態(tài)同結(jié)核分枝桿菌，可感染人類,暗產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon Ⅱ群）,瘰疬分枝桿菌（M.scrofulaceum）：可引起人的淋巴結(jié)炎或肺部感染。 斯氏分枝桿菌(M.szulgai)：可引起成人肺部的慢性感染。,不產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon Ⅲ群）,鳥-胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合體 (M.avium-intracellulare complex,MAC or MAIC)：鳥分枝桿菌和胞內(nèi)分枝桿菌有許多相似之處，故合起來稱之為MAC。近年來發(fā)現(xiàn)HIV感染和AIDS患者易感染MAC。 潰瘍分枝桿菌（M.ulcerans）：對(duì)人可通過創(chuàng)傷局部感染，常在四肢伸側(cè)形成無痛性潰瘍，叫做Buruli潰瘍，緩慢愈合或出現(xiàn)繼發(fā)感染。 蟾蜍分枝桿菌（M.xenopi）：是蟾蜍肉芽腫的病原菌，對(duì)人則多引起老年男性的慢性肺部感染。,快速生長(zhǎng)分枝桿菌（Runyon Ⅳ群）,⑴偶發(fā)分枝桿菌（M.fortuitum）：可引起人的局部感染或肺部感染，對(duì)現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物均耐藥。 ⑵龜分枝桿菌（M.chelonei）：該菌在引起免疫力低下患者感染的快速生長(zhǎng)非結(jié)核分枝桿菌中最常見，外傷引起的軟組織病變及手術(shù)后繼發(fā)感染，亦可引起肺部感染。 ⑶ 膿腫分枝桿菌（M.abscessus）：以前曾作為龜分枝桿菌膿腫亞種。常存在于自來水中，引起注射后醫(yī)院感染的暴發(fā)。該菌也可散發(fā)引起豐胸術(shù)后、中心靜脈插管、動(dòng)脈插管以及透析導(dǎo)管所致的菌血癥。另外，該菌可導(dǎo)致：近90%由快速生長(zhǎng)分枝桿菌引起的肺部感染，外傷后感染以及超過90%鼓膜切開管植入術(shù)后耳炎。與龜分枝桿菌相似，該菌引起免疫力缺陷患者播散性皮下感染。,膿腫分枝桿菌引起的注射后感染,膿腫分枝桿菌引起的注射后感染,膿腫分枝桿菌引起的注射后感染,難于愈合的傷口,潮濕治療室曾導(dǎo)致肌肉注射感染,,表現(xiàn)： 1998年4月1日～5月31日共手術(shù)292例，4月22日～7月14日發(fā)生切口感染166例。潛伏期為20～30天。切口部位開始為小結(jié)節(jié)，繼而化膿成竇道，有線頭挾出。清創(chuàng)換藥后創(chuàng)面清潔但不愈合，或愈合后又復(fù)發(fā)，并有淋巴結(jié)炎傾向。 調(diào)查：20份切口分泌物標(biāo)本培養(yǎng)出龜分枝桿菌（膿腫亞型）。醫(yī)院環(huán)境和無菌物品細(xì)菌學(xué)檢查合格。使用中和未啟用的戊二醛半小時(shí)不能殺滅金葡菌、1小時(shí)不能殺滅龜分枝桿菌，測(cè)濃度為0.137%。 結(jié)論：戊二醛濃度錯(cuò)配導(dǎo)致手術(shù)器械分枝桿菌污染，從而引起切口感染。,某醫(yī)院手術(shù)切口分枝桿菌感染暴發(fā)（廣東深圳，1998）,深圳孕婦感染事件開庭： 46人索賠2000多萬(wàn)元,,肌注部位偶發(fā)分枝桿菌感染暴發(fā)（福建南平，1998）,表現(xiàn)： 1998年8月～11月某診所59例患者發(fā)生肌注部位感染，潛伏期2～80天。起初肌注無明顯不適，少數(shù)針孔持續(xù)疼痛，多數(shù)在洗澡或接通知后撫摸發(fā)現(xiàn)注射處腫塊長(zhǎng)期不消。15天約長(zhǎng)0.5～1.0cm，后期硬塊出現(xiàn)波動(dòng)感，壓痛明顯，出現(xiàn)水樣膿液。繼發(fā)腹股溝淋巴結(jié)炎4例。膿液或病理標(biāo)本43份中33份檢出偶發(fā)分枝桿菌。 調(diào)查：檢查27種藥物、一次性注射器和輸液器均合格；其他診所肌注者無發(fā)??；診所衛(wèi)生條件差，1個(gè)水龍頭，自來水直接從河中抽取，未消毒；玻璃注射器15枝，煮沸消毒，時(shí)間憑經(jīng)驗(yàn)，每天消毒1次；患者多時(shí)使用同種藥物者換針頭不換注射器。 結(jié)論：污染注射器是引起感染暴發(fā)的主要原因，細(xì)菌則可能來自河水。,,,,,,（一）標(biāo)本采集 見結(jié)核桿菌部分 （二）涂片抗酸染色 本菌為抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，大小約1～8μm×0.3～0.5μm，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列 （三）分離培養(yǎng)與鑒定,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 ⑴光產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon Ⅰ群） 菌落特點(diǎn)是在暗處一般不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生少量色素，光照1h后能在48h內(nèi)轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色 需在營(yíng)養(yǎng)復(fù)雜的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，菌落光滑 有時(shí)可形成索狀生長(zhǎng),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 （2）暗產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon Ⅱ群） 無論有光或無光均能產(chǎn)生色素，呈黃色或橘黃色 生長(zhǎng)緩慢，菌落為光滑型,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 ⑶ 不產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon Ⅲ群） 缺乏β-胡蘿卜素，故在光照和暗處均不能產(chǎn)生色素,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 ⑷ 快速生長(zhǎng)分枝桿菌（Runyon Ⅳ群） 在普通培養(yǎng)基上即可生長(zhǎng) 最適生長(zhǎng)溫度為25～45℃ 生長(zhǎng)速度快，3～6d即可形成菌落,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),微需氧培養(yǎng)4天,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）其他鑒定方法 NTM非培養(yǎng)方法的鑒定與結(jié)核分枝桿菌類似，可參考結(jié)核桿菌部分。 NTM的實(shí)驗(yàn)室診斷可跟據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)速度、色素等表型特征進(jìn)行初步鑒定，再進(jìn)行分子診斷，后者應(yīng)用越來越廣泛。,第三節(jié) 麻風(fēng)分枝桿菌,麻風(fēng)病的病原菌，麻風(fēng)是一種慢性傳染病，主要表現(xiàn)為皮膚、黏膜和神經(jīng)末梢的損害。晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫。 根據(jù)臨床表現(xiàn)、免疫病理變化和細(xì)菌檢查結(jié)果等將麻風(fēng)分為瘤型、結(jié)核樣型和界限類綜合征等三種病型。,麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）,麻風(fēng)病的病原菌 1873年挪威學(xué)者Armauer Hansen從麻風(fēng)患者皮膚結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)，又名Hansen桿菌。 革蘭染色陽(yáng)性 具有抗酸性,一、臨床意義,WHO自1995年始對(duì)麻風(fēng)患者實(shí)施免費(fèi)治療 麻風(fēng)病發(fā)病率直線下降 2008年全球新發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)患者249000例 中國(guó)現(xiàn)癥麻風(fēng)病患者由解放初期的50多萬(wàn)人減少至目前的6000余人 2001～2008年,我國(guó)每年新發(fā)現(xiàn)患者1400～1700例,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）基本特性 本菌為抗酸桿菌，較結(jié)核分枝桿菌短而粗，大小約1～8μm×0.3～0.5μm，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列。 麻風(fēng)分枝桿菌為典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)分枝桿菌存在的細(xì)胞胞漿呈泡沫狀，稱為麻風(fēng)細(xì)胞。 用藥后細(xì)菌可斷裂為顆粒狀、鏈桿狀等，著色不均勻，叫做不完整菌。 革蘭染色陽(yáng)性，無鞭毛、無莢膜、無芽胞。,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（二）標(biāo)本采集 通常自眶上、顴下、下頜、耳廓及鼻腔黏膜等數(shù)處采取標(biāo)本,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）標(biāo)本直接檢查 1.顯微鏡檢查 用刀刮取組織液做涂片，火焰固定，抗酸染色、鏡檢，麻風(fēng)分枝桿菌呈紅色，細(xì)胞呈藍(lán)色。金胺“O”染色、熒光顯微鏡檢查，可提高陽(yáng)性率 麻風(fēng)分枝桿菌多呈束狀或成團(tuán)聚集，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。麻風(fēng)分枝桿菌菌體粗直，兩端尖細(xì)，而結(jié)核分枝桿菌則細(xì)長(zhǎng)略彎曲，且有分枝現(xiàn)象。在鏡下可見大量麻風(fēng)細(xì)胞。 2.活組織切片 抗酸染色及病理學(xué)檢查。,,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）其他診斷方法 該菌目前尚不能人工培養(yǎng) 近年采用PCR技術(shù)檢測(cè)麻風(fēng)菌基因、運(yùn)用新發(fā)現(xiàn)抗原血清學(xué)與T細(xì)胞試驗(yàn)可以對(duì)麻風(fēng)病進(jìn)行早期診斷。,小 結(jié),NTM指MTB和麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌。此類細(xì)菌廣泛分布。其診斷跟據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)速度、色素等表型特征進(jìn)行初步鑒定，分子診斷應(yīng)用越來越廣泛。 麻風(fēng)分枝桿菌為麻風(fēng)病的病原菌，胞內(nèi)寄生，形態(tài)較結(jié)核分枝桿菌短而粗，抗酸染色陽(yáng)性，著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列，無鞭毛、無莢膜、無芽胞。 放線菌對(duì)人致病的主要有放線菌屬和諾卡菌屬。前者為厭氧或微需氧菌，細(xì)胞壁中不含分枝菌酸，多引起內(nèi)源性感染；后者為需氧菌，細(xì)胞壁中含有分枝菌酸。,