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1 檢 驗 原 始 記 錄 編號 報告類別 微生物 共 頁 項目 大腸菌群 coliforms 檢驗地點 樣品名稱 樣品編號 樣品狀態(tài) 符合檢驗要求 其他 環(huán)境條件 實驗依據(jù)及步驟 GB4789 3 2016 固體和半固體樣品 稱取 25g 樣品置盛有 225ml 生理鹽水或磷酸鹽緩沖液 的無菌均質容器內均質 或放入盛有 225ml 稀釋液的無菌均質袋中拍擊式均質 器拍打 制成為 1 10 樣品勻液 依次進行 10 倍遞增稀釋 樣品稀釋 液體樣品 以無菌吸管吸取 25ml 樣品置盛有 225ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽 水的無菌錐形瓶 瓶內預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠 中混勻 為 1 10 樣品勻 液 樣品勻液的 ph 應在 6 5 7 5 之間 必要時分別用 1mol lNaOH 或 1mol lHcL 調 節(jié) 取 1mL1 10 稀釋勻液沿管壁緩緩注入 9ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無 菌試管中 注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面 振搖試管或換用一支無 菌吸管反復吹打 使其混合均勻 制成 1 100 樣品勻液 按上述操作順序做 10 倍遞增稀釋液 每稀釋一次 換用一支 1mL 滅菌吸 量管 從樣品勻液制備到樣品接種完畢 全過程不得超過 15min 初發(fā)酵試驗 9 管法 每個樣品 選擇 3 個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液 液體樣品可以選擇原液 每個稀釋度接種 3 管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨 LST 肉湯 大腸菌群測定 如 果超過 1ml 則用雙料 LST 肉湯 36 1 培養(yǎng) 24h 2h 觀察倒管內是否有氣泡產生 產氣者進行復發(fā)酵試驗 未產氣則繼續(xù)培養(yǎng)至 48 2h 產期進行復發(fā)酵試驗 未產氣者為大腸菌群陰性 復發(fā)酵試驗 證實試驗 用接種環(huán)從產氣的 LST 肉湯管中分別取培養(yǎng)物 1 環(huán) 移種于煌綠糖膽鹽肉湯 BGLB 管中 36 1 培養(yǎng) 48h 2h 觀察產氣情況 數(shù)據(jù)分析與結果 2 一 菌落計數(shù) 根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù) 查 MPN 檢索表 報告大腸菌群的最可能數(shù) 二 緩沖液 1 磷酸鹽緩沖液 磷酸二氫鉀 34 0g 蒸餾水 500ml 稀釋液需要 1000ml 貯存液 將 34 0g 磷酸二氫鉀溶于 500ml 蒸餾水中 用大約 175ml 的 1mol l 氫氧化鈉溶液調 節(jié) ph 至 7 2 用蒸餾水稀釋至 1000ml 后貯存冰箱 稀釋液 取貯存液 1 25ml 用蒸餾水稀釋至 1000ml 分裝于適宜容器 121 高壓滅菌 15min 2 無菌生理鹽水 氯化鈉 8 5g 蒸餾水 1000ml 將稱取好的氯化鈉溶于 1000ml 蒸餾水中 121 高壓滅菌 15min 3 PH 調節(jié)劑 1mol l 氫氧化鈉溶液 稱取 40g 氫氧化鈉溶于 1000ml 無菌蒸餾水中 1mol l HcL 溶液 移取 Hcl 90ml 用無菌蒸餾水稀釋至 1000ml 三 微生物限量采樣方案 根據(jù) GB 4789 1 2016 1 采樣方案分為二級和三級方案 二級采樣方案設有 n c m 值 三級采樣方案設有 n c m 和 M 值 n 同一批次產品應采集的樣品件數(shù) c 最大可允許超出 m 值的樣品數(shù) m 微生物指標可接受水平的限量值 M 微生物指標的最高安全限量值 2 例 n 5 c 2 m 1cfu g M 10cfu g 即從一批產品中采集 5 個樣品 若 5 個樣品的檢測結果均小于或等于 m 值 1cfu g 則這種情況是允許的 若 2 個樣品的結果 X 位于 m 值和 M 值之間 1cfu g X 10cfu g 則這種情況 也是允許的 若有 3 個及以上樣品的檢驗結果位于 m 和 M 之間 則這種情況是不允許的 若有任一樣品的檢驗結果大于 M 10cfu g 則這種情況也是不允許的 檢測記錄 校對 檢測日期 3 4 菌落總數(shù)檢樣原始記錄 初發(fā)酵試驗 未產氣培養(yǎng) 48 2h 復發(fā)酵實驗 接種 BGLB 管 結果 稀釋液及產氣管 數(shù) 稀釋液及產氣管 數(shù) 稀釋液及產氣管 數(shù) MPN 檢索表 各試樣菌 落分析 個產品 名稱 檢測 日期 時間 試 樣 編 號 接 種 日 期 時 間 結 果 日 期 時 間 CFU ml n 5 c 2 m 102 M 104 結論 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 5 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6